Проект КП-06-Н76/5 – Работна програма
Цели и задачи на ArnicaSTLactones:
1.Производство на растителна биомаса от shoot култури (култури от прорастъци) на агарова среда и при използване на биореакторна система с временно потапяне.
1.1 Въвеждане в култура in vitro.
1.2. Микроразмножаване с цел получване на множество in vitro растения.
1.3.Проучване влиянието на различни биотични и абиотични елиситори – метил жасмонат, салицилова киселина, дрожден екстракт и SiO2NP, добавени в агарова и течна хранителна среда върху микроразмножаването, растежните характеристики и качеството на in vitro растенията, добива на растителна биомаса.
2.Биохимично и фитохимично характеризиране на растенията след елиситиране
2.1. Метаболитен профил на получените in vitro растения чрез GC/MS анализ;
2.2. Изследване на ензимния и неензимния антиоксидантен капацитет, както и оценка на общата антиоксидантна активност чрез DPPH и FRAP метод.
2.3. Качествен и количествен анализ на сескитерпеновите лактони след елиситиране
2.4. Проучване на ацетилхолинестеразната инхибиторна активност на получените in vitro растения
3. Анализ на елиситор-индуцираните транскрипционни промени на ключови гени, участващи в биосинтезата на сескитерпеновите лактони
3.1. Екстрахиране и пречистване на РНК от култура от прорастъци, третирани с различни елиситори. Количествена и качествена оценка на РНК проби чрез спектрофотометричен анализ и електрофореза в агарозен гел
3.2. Получаване на кДНК (cDNA) чрез обратна транскрипция
3.3. Селекция на референтни гени и конструиране на праймери за RT-qPCR
3.4. Експресионен анализ на основни гени от биосинтетичния път на сескитерпеновите лактони (FDS, GAO, и GAS), както и на селектирани гени HMGCR, IDI, DXS и DXR включени в биосинтезата на терпенови прекурсори от MVA и MEP/DOXP биосинтетични пътища.