Проект БиоСС – Работна програма
Работната програма е разпределена на шест Работни пакета. Във всеки РП, освен експерименталните дейности са планирани и дейности, свързани с обезпечаване с необходимите материали, консумативи и апаратура за анализи (съгласно ЗОП и други изисквания според законодателството на Република България), както и за разпространението на научните резултати и обучението на млади участици на всички експериментални техники, заложени в съответните РП на проекта. Експерименталните дейности по проекта са разделени на методологична база: ще се изследват биометричнии и фитопатологични показатели (РП1), чрез биохимични методи ще се определя съдържание на стресови маркери, неензимни антиоксиданти, растежния регулатор СК, микотоксина DON, активност на антиоксидантни и метаболитни ензими (РП2); чрез молекулярно-биологични методи ще бъде проследена експресията на гени, кодиращи антиоксидантни ензими, ДАО, ПАО и PR-протеини (РП3); фотосинтетичната активност (РП4) ще бъде изследвана чрез биофизични методи. Прецизна хроматографска техника (система за HPLC) ще бъда използвана за определяне на съдържанието на ПА в растителната маса и третираните със Спермин семена (РП5). Дейностите в РП6 са свързани с разработване на експериментален in vivo модел при плъх с прием на зърно, обработено със Спермин.
Работни пакети
Работен пакет 1 – Ефект на „прайминг“ на семена със спермин върху фузарийно кореново и базично гниене по пшеница
В този пакет са планирани експериментални дейности, включващи отглеждане на фитопатогени, отчитане на развитието на патогените в опити in vitro върху хранителни среди с или без включен в тях Спермин; предватирелно третиране на семена от пшеница със Спермин, инокулиране на семена и почва с патогенни гъби, култивиране на пшеничени растения при контролирани условия на експерименталната среда, събиране на растителни проби и отчитане на нападението от кореново и базично гниене по отделните растения, повторения и варианти.
Работен пакет 2 – Биохимични изследвания
Планирани са дейности, базирани на биохимични методи за определяне съдържанието на стресови маркери (малондиалдехид, водороден пероксид), осмолити (пролин и редуциращи захари) неензимни антиоксиданти (общи феноли, общи тиолови групи, флавоноиди), общ белтък; антиоксидантна ензимна активност (каталаза, гваякол пероксидаза, супероксид дисмутаза, глутатион редуктаза, глутатион S-трансфераза), активност на ДАО и ПАО и фенилаланин амоняк лиаза; съдържание на микотоксина (ДОН) и растежния регулатор (СК). Ще бъде определено и изтичане на електролити от растителните клетки.
Работен пакет 3 – RT-qPCR анализ на избрани гени, кодиращи антиоксидантни ензими, полиаминни катаболитни ензими и PR-протеини
Планирани са експериментални дейности, основани на молекулярни методи за експресията на гени, кодиращи гореспоменатите антиоксидантни ензими, ДАО и ПАО, чиято активност ще бъде измервана в РП2, както и на избрани PR-протеини.
Работен пакет 4 – Оценка на функционалите характеристики на фотосинтетичния апарат
Този РП включва експериментални дейности по измерване на съдържанието на фотосинтетични пигменти, измерване на листния газообмен и хлорофилната флуоресценция.
Работен пакет 5 – Определяне на ендогенни полиамини чрез HPLC
Планирано е измерване на ендогенните ПА в надземната част на моделните растения, както и в третирани и нетретирани със Спермин семена.
Работен пакет 6 – Експериментален in vivo модел при плъх за изследване на потенциалния здравен риск от употребата на спермин за предварителна обработка на семена от пшеница
Планирано е разработване на експериментален in vivo модел при плъх за изследване на потенциалния здравен риск от употребата на Сперминза предварителна обработка на семена от пшеница.
